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當前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > 生化試劑 > 常見抗生素 > AB11L124潮霉素B (Hygromycin B)

潮霉素B (Hygromycin B)

簡要描述:潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細胞。

  • 產(chǎn)品型號:AB11L124
  • 廠商性質:生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-08-07
  • 訪  問  量:1498

產(chǎn)品分類

Product Category

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詳細介紹

品牌其他品牌貨號AB11L124
供貨周期現(xiàn)貨應用領域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥

潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細胞。

大腸桿菌( Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),編碼潮霉素B磷酸轉移酶,將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,從而起到解毒作用。針對這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記,用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外,由于作用模式的差異,常與G418 (Cat:AB11L234),Zeocin(Cat:AB11L251)和Blasticidin S(Cat:AB11L221)聯(lián)合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,因其選擇性滲透進入yin病毒感染增強通透性的細胞,且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅蟲功能。

訂購信息

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

潮霉素B (Hygromycin B)

AB11L124

1 g


運輸與保存

常溫運輸。4℃保存,有效期48個月

技術參數(shù)

1.CAS:31282-04-9

2.溶解性:100mg/ml in Water

3.純度:≥90%

4.酶活/效價:≥950U/mg

5.結構式:

使用方法

1.常用篩選濃度

【注】:潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2.殺滅曲線的建立

【注】:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素zui低濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。

(1)第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。

(2)根據(jù)細胞類型,設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

終濃度(μg/mL)

培養(yǎng)基體積(ml)

5mg/ml潮霉素B加入體積(ml)

50

9.9

0.1

100

9.8

0.2

250

9.5

0.5

500

9.0

1.0

750

8.5

1.5

1000

8.0

2.0




(3)第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

(4)接下來每3-4 d更換新的含藥物培養(yǎng)基。

(5)按照固定的周期(如每2 d)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10 d)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的zui低濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。

(3)穩(wěn)定轉染細胞的篩選

(1)轉染48 h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

【注】:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果好。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,將細胞稀釋至豐度不超過25%。

(2)每隔3-4 d更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

(3)篩選7 d后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。

(4)挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7 d。

(5)之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

注意事項

1.本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了來自E. Coli.之外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

3.本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請小心操作。

4.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5.以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻, 李記生物暫未本產(chǎn)品進行獨立驗證, 僅供參考。



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