產(chǎn)品信息
　　Caspase 8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是通過測(cè)量Caspase 8的活性而用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)的。Caspase 8 是一種Caspase蛋白，CASP8基因所編碼。在神經(jīng)元變性疾病中，例如亨廷頓綜合癥，caspase 8扮演著重要角色。Caspase 8已被證明具有底物選擇性，其肽基序?yàn)镮le-Glu-Thr-Asp (IETD)。該試劑盒使(Ac-IETD)2-R110作為熒光指示器來檢測(cè)caspas-8的活性。通過caspas-8的切割R110肽產(chǎn)生強(qiáng)綠色熒光，其發(fā)射光在520 nm和530 nm之間，激發(fā)光為480 nm和500 nm之間。這種特性使得試劑盒能適合于FITC濾光器。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
　　本試劑盒提供所有必需組分和合適的操作流程。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，快速且適應(yīng)高通量篩選。它不僅能夠定量凋亡細(xì)胞中caspas-8的活性還能篩選caspas-8的抑制劑。
技術(shù)資料
1.Ex(nm)：500
2.Em(nm)：522
訂購信息

產(chǎn)品組分

實(shí)驗(yàn)方案
1.用測(cè)試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細(xì)胞。
2.加入等體積的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）。
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)。
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加（截止= 515 nm）。
5.將50μLCaspase8底物（組分A）加入10mL測(cè)定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 8工作溶液（溶液需避光保存）。
【注】：Caspasae 8工作液不穩(wěn)定，請(qǐng)及時(shí)使用。 
操作步驟
1.通過將10μL/孔的10X測(cè)試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測(cè)試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細(xì)胞。對(duì)于空白孔（沒有細(xì)胞的培養(yǎng)基），加入相同量的化合物緩沖液。
2.將細(xì)胞板在5％CO 2,37℃培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時(shí)間（對(duì)于用喜樹堿或星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞，4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 8工作溶液。
4.將板在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)，避光。
【注】：如果需要，在室溫下加入Caspase 8工作溶液10分鐘前，向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑，以確認(rèn)對(duì)caspase 8樣活性的抑制作用。
5.以800rpm離心細(xì)胞板（特別是對(duì)于非貼壁細(xì)胞）2分鐘（制動(dòng)關(guān)閉）。
6.用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下監(jiān)測(cè)熒光增加。
數(shù)據(jù)分析
   
圖1.使用Cell Meter Caspase 8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)Jurkat細(xì)胞中的caspase 8活性
 
　　在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的一天以200,000個(gè)細(xì)胞/90μL/孔接種Jurkat細(xì)胞。 用或不用20μM喜樹堿處理細(xì)胞4小時(shí)。 加入半胱天冬酶8工作溶液（100μL/孔）并在室溫下溫育1小時(shí)。 使用FlexStation 酶標(biāo)儀（Molecular Devices）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止值= 515nm）下測(cè)量熒光強(qiáng)度。
注意事項(xiàng)
該產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。