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當前位置:首頁 > 產品中心 > PCR&q-PCR > 核酸定量測定 > AN54L029PikoGreen dsDNA quantitation reagent

PikoGreen dsDNA quantitation reagent

簡要描述:PikoGreen dsDNA quantitation reagent(優(yōu)于PicoGreen)是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料,于雙鏈DNA的定量。測定DNA濃度在cDNA文庫構建、DNA亞克隆、PCR產物估測等領域中非常重要,另外疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測因關系人身健康,顯得尤為重要。

  • 產品型號:AN54L029
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-08-06
  • 訪  問  量:2323

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詳細介紹

品牌其他品牌貨號AN54L029
規(guī)格1ML供貨周期現(xiàn)貨
主要用途在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測低至25 pg/m應用領域化工,生物產業(yè)

產品描述

PikoGreen dsDNA quantitation reagent是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料,僅與DNA雙鏈結合后才發(fā)出熒光,且所產生的熒光與DNA濃度呈正比,在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測低至25 pg/mL的dsDNA。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比,具有靈敏度高,特異性強,耐受性好,線性范圍寬及方便操作等優(yōu)點,適用于cDNA文庫構建、DNA亞克隆、PCR產物等領域的DNA濃度的精確測定。相比傳統(tǒng)的方法,Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢:

  1. 靈敏:數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感,可節(jié)省樣品。

  2. 特異性強:只結合dsDNA,特異性強,不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA,蛋白,RNA等影響。

  3. 耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴增產物而無需從反應混合物中純化DNA。

  4. 線性范圍寬:PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度,在100pg/ml-100ng/ml范圍內呈良好線性;熒光計兼容。

  5. 容易使用:在樣品中加入染料,等待5~6 min染色,然后讀數(shù)即可,且適用于96和384孔板。與大多數(shù)基于熒光的酶標儀和可適用于各種DNA樣品分析、PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領域。

該分析在四個數(shù)量級范圍內呈線性,且?guī)缀鯚o序列依賴性,可以精確地測量多個來源的DNA,包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產物。該方法因其穩(wěn)定性、靈敏性,已經錄入《中國藥典》。
訂購信息

產品名稱貨號規(guī)格
PikoGreen dsDNA quantitation reagent(優(yōu)于PicoGreen)AN54L0291 mL

運輸與保存
藍冰運輸。-20℃避光保存,有效期24個月。
使用方法
1. PikoGreen工作液的配制
使用前將PikoGreen dsDNA定量試劑回溫至室溫;PikoGreen以100 µL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的(共10管)。實驗當天,根據(jù)實驗需求用1×TE按1:200 的比例稀釋適量定量試劑濃縮液。例如要準備足夠的操作溶液以2 mL檢測體系測定20個樣品,可向19.9 mL 1×TE 中加入100 µL PikoGreen dsDNA 定量試劑。工作液見光易降解,盡量在配好后幾小時內使用。
2. 配制標準品DNA溶液
(1)用1 X TE溶液溶解dsDNA制備1 μg/mL dsDNA 。根據(jù)在1 cm 光程長度的比色杯中A260 nm時的吸光度確定DNA 濃度;相應于1 μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。標準液常用小牛胸腺DNA制備,PikoGreen 試劑測定法在通常污染核酸*劑的幾種復合物存在的條件下仍能保持線性良好,但是,為了得到有效的對照處理,被用來做標準曲線的dsDNA 溶液要用和實驗樣品相同的方式來處理,并且應該包含相同的可能存在的污染物。
(2)制備從0.5 ng/mL 到500ng/mL(見表1)單重復8 個點的標準曲線。配制一系列的標準DNA 溶液,然后與等體積的PikoGreen 工作液混和,放入1 x 1cm 比色杯中?;旌舷嗤w積的1 x TE 和PikoGreen 操作溶液作為空白對照,避光于室溫下放置2~5 min。

表1: 用1 x 1cm 比色杯時DNA 標準濃度配制參考

標準DNA 溶液濃度(ng/mL)標準DNA 溶液體積(mL)PikoGreen 工作液體積(mL)標準DNA 終濃度(ng/mL)
100011500
20011100
501125
201110
5112.5
2111
1110.5
011空白

(3) 當用微量檢測皿適配器時,PikoGreen 測定也可在較低的測定體積(50 μL 到200 μL)內完成。產生從1 ng/mL 到100 ng/mL(見表2)的標準曲線,配制一系列的標準DNA 溶液,然后與等體積的PikoGreen 工作液混和,將至少50 μL 溶液轉移到微量檢測皿中。確信不要在樣品中引入氣泡,輕輕地彈微量檢測皿的外部經常可以驅散氣泡。避光于室溫下放置2-5 min。

表2:用微量檢測皿DNA 標準濃配制參考

標準DNA 溶液濃度(ng/mL)標準DNA 溶液體積(mL)PikoGreen 工作液體積(mL)標準DNA 終濃度(ng/mL)
2003030100
50303025
20303010
530302.5
230301
03030空白

(4) 孵育后用合適的熒光計測量樣品熒光值。Ex/Em=480 nm/520 nm,為了減少光漂白,應保持所有樣品的檢測時間一致。用熒光值最大的樣品校正儀器。
(5)用檢測數(shù)據(jù)與DNA標準溶液濃度做回歸分析,制作標準曲線。
3. 樣品分析
(1)用1 x TE 稀釋待測DNA 樣品至需要的體積(1x1 cm 比色杯需1.0 mL,微量檢測皿需25~100 μL)。對樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被最大限度地沖淡。然而,也要避免取樣體積太小而無法精確吸取的情況。
(2)在每個樣品中加入等體積PikoGreen 工作液,混合好,將混合物移入合適的比色杯,避光于室溫下放置2~5 min。
(3)檢測、讀取熒光值,換算樣品中dsDNA濃度??梢詫悠愤M行不同的稀釋處理重復測定以確保結果的準確性。
注意事項

  1. 本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

  2. PikoGreen定量試劑含有DMSO,PikoGreen 是結合dsDNA,操作時采取適當防護,戴手套小心操作。

  3. 盡管常見污染物不會影響PikoGreen 檢測dsDNA濃度(見表3),但是當樣品中dsDNA濃度太低,RNA, ssDNA濃度超過dsDNA 10倍以上時,RNA, ssDNA等污染還是會對檢測結果產生較大干擾,在此種情況下,RNA 酶可以消除RNA干擾, RNA 酶A、酶T1 、核酸酶S1 結合能除去ssDNA干擾,從而保證樣品熒光值是由dsDNA 產生。


表3:Pikogreen定量耐受的污染物列表

物質名稱最大耐受濃度信號變化百分比
Salts
Ammonium acetate50 mM3% decrease
Sodium acetate30 mM3% increase
Sodium chloride200 mM30% decrease
Zinc chloride5 mM8% decrease
Magnesium chloride50 mM33% decrease
Urea2 M9% increase
Organic Solvents
Phenol0.1%13% increase
Ethanol10%12% increase
Chloroform2%14% increase
Detergents
Sodium dodecyl sulfate0.01%1% decrease
Triton X-1000.1%7% increase
Proteins
Bovine serum albumin2%16% decrease
IgG0.1%19% increase
Other Compounds
Polyethylene glycol2%8% increase
Agarose0.1%4% increase


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