Alexa Fluor 647 標記鬼筆環(huán)肽（遠紅）

產(chǎn)品描述
　　鬼筆環(huán)肽是從一種菌類Amanita Dhalloides所提取出來的環(huán)肽。它與F-actin競爭性的結(jié)合。熒光標記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結(jié)合并且易溶于水，為檢測組織切片，培養(yǎng)細胞和無細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標記方法。
　　本品為Alexa Fluor 647 標記鬼筆環(huán)肽（遠紅），可發(fā)出高亮度、穩(wěn)定的遠紅外熒光，染色反應特異性強，對比性高，適合用作F-actin的定性和定量檢測。與Actin抗體比較，本產(chǎn)品具有如下優(yōu)點：(1)與actin亞單位一比一結(jié)合，并且不與G-actin結(jié)合，具有比Actin抗體更好的染色效果。(2)且本品的結(jié)合沒有物種差異性，適用性廣泛。(3)鬼筆環(huán)肽標記的非特異性信號可忽略，因而圖像的反差較好。(4)染色與用于細胞分析的其他熒光染色*兼容，包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他Alexa Fluor偶聯(lián)物（包含Alexa Fluor偶聯(lián)二抗)。(5)經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。
技術(shù)資料
1. Ex(nm)：650
2. Em(nm)：665
3. 分子量：約2200
4. 溶劑：DMSO
5. 結(jié)構(gòu)式：

訂購信息

保存方法
　　冰袋運輸，收到貨后-20℃避光干燥保存，1年有效。
使用方法
1.   準備1000× DMSO Alexa Fluor 647標記鬼筆環(huán)肽存儲液
用30 μL DMSO 溶解粉末狀Alexa Fluor 647標記鬼筆環(huán)肽，可按需分裝并于-20℃避光干燥保存，分裝保存，避免反復凍融。
2.   準備1× Alexa Fluor 647標記鬼筆環(huán)肽工作液
吸取1 μL 1000×Alexa Fluor 647標記鬼筆環(huán)肽存儲液到1 mL 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。
【注】：不同的細胞染色后情況不同，相應Alexa Fluor 647鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。
3. 細胞染色步驟
（1）細胞培養(yǎng)過夜或更長，使其密度達到50~60%匯合度。
（2）吸掉培養(yǎng)液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。
（3）使用含有3~4%甲醛的PBS溶液進行細胞固定，室溫固定10~30 min。
【注】：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。
（4）室溫條件下，用PBS清洗固定好的細胞2~3次，每次10 min。
（5）（可選）：室溫條件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3~5 min，從而增加其通透性。
【注】：鬼筆環(huán)肽的分子量小，很容易通過細胞，一般情況下不需對細胞進行冷丙tong和TRITON X-100處理。
（6）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10 min。
（7）每孔加入 Alexa Fluor 647標記鬼筆環(huán)肽工作液100 μL/孔（96孔板），室溫避光染色20-90 min，夏季時間相對短些。
（8）用PBS清洗細胞3次，每次5 min，去除掉多余的Alexa Fluor 647標記鬼筆環(huán)肽。
（9）（可選）：加入足量的即用型DAPI溶液對細胞核進行復染，如：100 μL/孔（96孔板），室溫3~5 min。用PBS清洗細胞2次，每次5min。
（10）于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，選擇Alexa Fluor 647激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=650/665nm）和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454 nm）。