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LyGreen (20×in water) HRM染料 使用說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2017/11/14      點(diǎn)擊次數(shù):1315

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LyGreen (20×in water) HRM染料(20×水溶液)

產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格保存價(jià)格(元)

LyGreen (20×in water) HRM染料(20×水溶液)

D1201L2221

1ml

4℃

450.00

 

產(chǎn)品描述

LyGreen™核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合飽和熒光染料,是新一代用于HRM分析的熒光染料,也可用于實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個(gè)單體染料分子通過(guò)一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體,在沒(méi)有DNA存在時(shí),該結(jié)構(gòu)呈無(wú)熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu),一旦有DNA出現(xiàn),則恢復(fù)隨機(jī)形態(tài)并與DNA結(jié)合發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光。

與市場(chǎng)上其他熒光染料如SYBR Green I 相比,LyGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn):1)高靈敏度:在推薦濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I 更強(qiáng)的信號(hào)。2)準(zhǔn)確:結(jié)合雙鏈DNA,變形時(shí)染料不遷移,熒光信號(hào)準(zhǔn)確反映雙鏈DNA變化情況;過(guò)量染料形成二聚體,而不游離,使得LyGreen對(duì)PCR的抑制遠(yuǎn)小于SYBR Green I,因此,使用LyGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。3)高穩(wěn)定性:在正常的儲(chǔ)存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì)被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲(chǔ)存在室溫或冰箱里,也可以反復(fù)凍融。4)安全性好:細(xì)胞膜穿透性測(cè)試表明,LyGreen幾乎不能穿透細(xì)胞膜,安全性高。5)兼容性:和SYBR Green I 光譜相似,使用不同品牌qPCR儀器時(shí)不許改變光譜元件設(shè)置,也無(wú)需改變操作步驟,qPCR完成后,無(wú)需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。6)重復(fù)性好(如圖1.):特殊設(shè)計(jì)染料,相同反應(yīng)體系下,熒光信號(hào)釋放僅與雙鏈濃度有關(guān),線性。

此外,LyGreen在做HRM分析時(shí),相同反應(yīng)條件下,熒光信號(hào)穩(wěn)定而持久,重現(xiàn)性好。在微流PCR,恒溫?cái)U(kuò)增,毛細(xì)管電泳,DNA定量以及細(xì)胞活力鑒定等領(lǐng)域也具有的表現(xiàn)。本品以20×LyGreen水溶液形式提供(CAT#: D1003L5000 或D1003L5001)。另外,我公司也提供LyGreen HRM分析試劑盒(CAT#: D1101L1130),僅需添加引物和模板,可以體現(xiàn)LyGreen染料優(yōu)點(diǎn)。

應(yīng)用實(shí)例

 

圖1. LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析.

HRM分析設(shè)備為L(zhǎng)ightCycler@480熒光定量PCR儀(德國(guó)羅氏)

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。4 ºC干燥避光保存,保質(zhì)期12個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1)做qPCR時(shí)注意設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

2)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 光學(xué)性質(zhì)

激發(fā)波長(zhǎng)= 497 nm

發(fā)射波長(zhǎng)= 520nm

 實(shí)驗(yàn)方法

PCR反應(yīng)的配制(50uL)

 

試劑

用量

ddH2O

計(jì)算加水量,按終體積50µl, 

Taq DNA poLymerase

5U

2mM的 dNTP

5 uL

50mM MgCl2

2.5uL

20 X LyGreen

2.5uL

引物

0.1-1 uM(終濃度)


注意事項(xiàng)

 

1)  請(qǐng)根據(jù)不同的儀器類型,不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據(jù)所使用的Taq酶的不同進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化;

2)根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量于冰上向無(wú)菌離心管中依次加入水,Taq poLymerase buffer, dNTPs, MgCl2, LyGreen, Taq poLymerase, and primers等配制qPCR反應(yīng)體系(1×Master mix);

3)將1×Master mix 適量分裝至無(wú)菌PCR管中,并加入DNA (50 ng/反應(yīng));

4)按照儀器類型選擇合適的擴(kuò)增程序。

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